Маршрут Tirreno – Adriatico 2016 года был объявлен в декабре 2015 года в Камайоре , где начинается гонка. Первый этап - командная гонка на время на побережье на 22,7 км (14,1 мили) . Второй - и первый дорожный этап - завершается коротким подъемом, подходящим для классических райдеров. Третий и четвертый этапы имеют плоские финиши, в пользу спринтеров . Пятый этап является королевским этапом гонки: он включает пять подъемов по категориям, заканчивая 13-километровым восхождением на Монте-Сан-Вичино . Шестой этап снова подходит спринтерам. Гонка заканчивается в Сан-Бенедетто-дель-Тронто пятидесятый год подряд в индивидуальной гонке на время 10,1 км (6,3 мили), чтобы определить окончательное положение.
Поскольку Тиррено – Адриатико - это событие мирового тура UCI, все восемнадцать команд UCI Pro были автоматически приглашены и обязаны принять участие в гонке. Еще пяти командам были даны wild card для участия в гонке. Все команды прислали разрешенное количество гонщиков, восемь, всего 184 гонщика.