Чашка агара - Agar plate

Чашка агара
Использует Микробиологическая культура
Искусство
Похожие материалы Чашка Петри
Среда для выращивания
Загрязнение на чашке с агаром

Чашка с агаром - это чашка Петри , содержащая питательную среду, отвержденную агаром , используемую для культивирования микроорганизмов . Иногда для воздействия на рост добавляют селективные соединения, например антибиотики .

96 пиннер, используемый для точечных анализов дрожжевых, грибковых или бактериальных клеток

Отдельные микроорганизмы, помещенные на чашку, вырастут в отдельные колонии , каждая из которых является клоном, генетически идентичным отдельному организму-предку (за исключением низкой неизбежной скорости мутаций ). Таким образом, планшет можно использовать либо для оценки концентрации организмов в жидкой культуре, либо для подходящего разведения этой культуры с использованием счетчика колоний , либо для создания генетически чистых культур из смешанной культуры генетически различных организмов.

Доступны несколько методов для нанесения пластин на клетки. Один из методов известен как « полосы ». В этом методе капля культуры на конце тонкой стерильной петли проволоки, иногда называемой инокулятором, наносится на поверхность агара, оставляя организмы позади, большее число в начале полосы и меньшее число в конце. В какой-то момент во время успешной «полоски» количество депонированных организмов будет таким, что в этой области вырастут отдельные отдельные колонии, которые могут быть удалены для дальнейшего культивирования с использованием другой стерильной петли. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы не допустить загрязнения чашек.

Другой способ высеивания организмов на чашки с агаром - это точечный анализ . Этот тип анализа часто используется для проверки жизнеспособности клеток и выполняется с помощью пиннеров (часто также называемых лягушками). Третий используемый метод - использование стерильных стеклянных шариков для высева клеток. В этом методе клетки выращивают в жидкой культуре, небольшой объем которой наносится пипеткой на чашку с агаром, а затем распределяется вместе с шариками. Посев реплик - это еще один метод, позволяющий высеять клетки на чашки с агаром. Эти четыре метода являются наиболее распространенными, но возможны и другие. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы предотвратить загрязнение чашек с агаром. Таким образом, покрытие часто выполняется в шкафу с ламинарным потоком или на рабочем столе рядом с горелкой Бунзена .

История

В 1881 году Фанни Хессе , работавшая техником у своего мужа Вальтера Гессе в лаборатории Роберта Коха , предложила агар в качестве эффективного закрепляющего агента, поскольку он некоторое время был обычным явлением при приготовлении джема.

Типы

Чашка агара просматривается в электронном счетчике колоний
Агаровая культура колоний E. coli

Как и другие питательные среды , составы агара, используемые в чашках, можно классифицировать как «определенные» или «неопределенные»; определенная среда синтезируется из отдельных химических веществ, необходимых организму, поэтому точный молекулярный состав известен, тогда как неопределенная среда изготавливается из натуральных продуктов, таких как дрожжевой экстракт , где точный состав неизвестен.

Чашки с агаром могут быть сформулированы как разрешающие, с целью обеспечения роста любых присутствующих организмов, так и ограничительные или селективные, с целью обеспечения роста только определенной подгруппы этих организмов. Это может принимать форму потребности в питании, например, предоставление определенного соединения, такого как лактоза, в качестве единственного источника углерода и, таким образом, выбора только организмов, которые могут метаболизировать это соединение, или включения определенного антибиотика или другого вещества для отбора только организмов, которые являются устойчивыми к этому веществу. Это до некоторой степени коррелирует с определенными и неопределенными медиа; Неопределенные среды, изготовленные из натуральных продуктов и содержащие неизвестную комбинацию очень многих органических молекул, обычно более терпимы с точки зрения удовлетворения потребностей более широкого круга организмов, в то время как определенные среды могут быть точно адаптированы для отбора организмов с конкретными свойствами.

Чашки с агаром также могут быть индикаторными чашками, в которых организмы не отбираются на основе роста, а вместо этого отличаются изменением цвета в некоторых колониях, обычно вызванным действием фермента на какое-либо соединение, добавленное в среду.

Чашки инкубируют от 12 часов до нескольких дней в зависимости от выполняемого теста.

Некоторые часто используемые типы чашек с агаром:

Красные кровяные тельца на чашке с агаром используются для диагностики инфекции . Слева положительный результат на стафилококк , справа - положительный результат посева на стрептококк .

Кровяной агар

Гемолизы Streptococcus spp. (слева) α-гемолиз ( S. mitis ); (в центре) β-гемолиз ( S. pyogenes ); (справа) γ-гемолиз (= негемолитический, S. salivarius )

Пластина с кровяным агаром

Чашки с кровяным агаром (БАТ) содержат кровь млекопитающих (обычно овец или лошадей), обычно в концентрации 5–10%. BAP - это обогащенные дифференциальные среды, используемые для выделения требовательных организмов и определения гемолитической активности. β-Гемолитическая активность показывает лизис и полное переваривание содержимого красных кровяных телец, окружающих колонию. Примеры включают Streptococcus haemolyticus . α-Гемолиз вызывает только частичный лизис эритроцитов (клеточная мембрана остается неповрежденной) и приобретает зеленый или коричневый цвет из-за превращения гемоглобина в метгемоглобин. Примером этого может быть Streptococcus viridans . γ-Гемолиз (или негемолитический) - это термин, относящийся к отсутствию гемолитической активности. БАП также содержат мясной экстракт , триптон , хлорид натрия и агар.

Шоколадный агар

Шоколадный агар - это пластинка с кровяным агаром, в которой клетки крови лизируются путем нагревания клеток до 80 ° C. Он используется для выращивания привередливых респираторных бактерий, таких как Haemophilus influenzae . На самом деле в тарелке нет шоколада ; он назван только по окраске.

Агар с конской кровью

Агар с конской кровью - это разновидность обогащенной кровью микробиологической питательной среды. Поскольку он обогащен, он способствует росту некоторых привередливых бактерий и позволяет определять гемолитическую активность этих бактериальных культур.

Агар Тайера-Мартина

Агар Тайера-Мартина - это шоколадный агар, предназначенный для выделения Neisseria gonorrhoeae .

Тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахарозный агар

Агар тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахароза усиливает рост Vibrio spp. , включая холерный вибрион .

Общие бактериальные среды

Четыре типа чашек с агаром, демонстрирующих дифференцированный рост в зависимости от метаболизма бактерий.
Грибы ( аскомицеты ), растущие в аксенических культурах , каждая из которых является культурой одного выбранного организма и свободна от всех других организмов, что позволяет изучать культивируемый организм изолированно
Aspergillus niger, выращиваемый на картофельном агаре с декстрозой
  • Питательный агар обычно используется для выращивания неприхотливых организмов и наблюдения за производством пигментов. Его безопасно использовать в школьных научных лабораториях, поскольку он не способствует избирательному росту болезнетворных бактерий.
  • Агар Ёноз позволяет более быструю бактериологическую диагностику, поскольку колонии сальмонелл и шигелл можно четко и надежно отличить от других энтеробактерий. Урожайность Salmonella в образцах стула, полученных при использовании этой среды, выше, чем при использовании агара LEIFSON или агара Salmonella – Shigella .
  • Агар с фенилэтиловым спиртом выбирает виды стафилококков , подавляя при этом грамотрицательные бактерии (например, Escherichia coli , Shigella , Proteus и т. Д.).
  • Агар R2A, неспецифическая среда, имитирующая воду, поэтому используется для анализа воды.
  • Триптический (триптиказный) соевый агар (TSA) - это среда общего назначения, получаемая путем ферментативного переваривания соевого шрота и казеина . Часто это основная среда для других типов агара; например, чашки с кровяным агаром изготавливают путем обогащения чашек TSA кровью. Чашки TSA поддерживают рост многих полужадных бактерий, включая некоторые виды Brucella , Corynebacterium , Listeria , Neisseria и Vibrio .
  • Ксилоза - лизин - дезоксихолат использует агар для культуры стула образцов и содержит два индикатора. Он разработан для подавления грамположительных бактерий, при этом стимулируется рост грамотрицательных бацилл . Колонии ферментеров лактозы кажутся желтыми. Он также используется для культивирования возможных сальмонелл, которые могут присутствовать в образце пищи. Большинство колоний сальмонелл имеют на себе черный центр.
  • Цетримидный агар используется для селективного выделения грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosa .
  • Агар Тинсдейла содержит теллурит калия , который может изолировать коринебактерии дифтерии .

Грибковые среды

Вид снизу чашки с агаром Сабуро с колонией Trichophyton rubrum var. Родайни
  • Агар Сабуро используется для культивирования грибов и имеет низкий pH, что подавляет рост большинства бактерий; он также содержит антибиотик гентамицин, специфически подавляющий рост грамотрицательных бактерий.
  • Агар для настаивания сена специфичен для культивирования слизистой плесени (которая не является грибком).
  • Картофельный агар с декстрозой используется для культивирования некоторых видов грибов.
  • Агар с солодовым экстрактом имеет высокое содержание пептона и является кислым. Он в основном используется для изоляции грибковых микроорганизмов.

Моховые СМИ

Дрожжевые среды

  • Среда YEPD часто используется в качестве общей среды для роста дрожжей, таких как Saccharomyces cerevisiae и Candida albicans.
  • Среда для споруляции - это среда, используемая, когда должны образоваться споры. Его также можно использовать при работе с грибами или бактериями, в зависимости от того, способен ли штамм образовывать споры.

Мега тарелка

  • Чашка Петри размером 2 x 4 дюйма, заполненная 14 л (литрами) агаровой среды, полученной из морских водорослей, созданная учеными из Гарварда, которая использовалась, чтобы увидеть, как E. coli эволюционировала и стала устойчивой к антибиотикам. Мегапластина также помогла изучить более уникальные концепции микробиологии, такие как параллельная эволюция, мутационный отбор, колониальное вмешательство и т. Д.
дрожжи Candida albicans, растущие как дрожжевые клетки, так и нитчатые клетки на агаре YPD

Смотрите также

Различные специфические типы агара:

Рекомендации

Внешние ссылки