Тест Кумбса - Coombs test

Тест Кумбса
MeSH D003298
MedlinePlus 003344

Тест Кумбса , также известный как тест на антиглобулин ( AGT ), представляет собой один из двух анализов крови, используемых в иммуногематологии . Это прямой и косвенный тесты Кумбса. Прямой тест Кумбса обнаруживает антитела, прилипшие к поверхности красных кровяных телец. Поскольку эти антитела иногда разрушают эритроциты, человек может страдать анемией, и этот тест может помочь прояснить его состояние. Непрямой Кумбс обнаруживает антитела, которые свободно плавают в крови. Эти антитела могут действовать против определенных эритроцитов, и тест может быть проведен для диагностики реакции на переливание крови .

Прямой тест Кумбса используется для проверки на аутоиммунную гемолитическую анемию, то есть состояние, при котором иммунная система разрушает эритроциты , что приводит к анемии . Прямой тест Кумбса используется для обнаружения антител или белков комплемента, прикрепленных к поверхности эритроцитов. Для проведения теста берут образец крови и промывают эритроциты (удаляя собственную плазму пациента и несвязанные антитела из красных кровяных телец), а затем инкубируют с античеловеческим глобулином («реагент Кумбса»). Если затем эритроциты агглютинируют , прямой тест Кумбса дает положительный результат, что является визуальным признаком того, что антитела или белки комплемента связаны с поверхностью эритроцитов и могут вызывать разрушение этих клеток.

Непрямой тест Кумбса используется при пренатальном тестировании беременных женщин и при тестировании перед переливанием крови. Тест обнаруживает антитела против чужеродных эритроцитов. В этом случае сыворотка берется из образца крови, взятого у пациента. Сыворотка инкубируется с чужеродными эритроцитами известной антигенности . Наконец, добавляется античеловеческий глобулин. Если происходит агглютинация, непрямой тест Кумбса положительный.

Механизм

Схема, показывающая прямой и косвенный тесты Кумбса.

Два теста Кумбса основаны на связывании античеловеческих антител с человеческими антителами, обычно IgG или IgM . Эти антитела против человека продуцируются плазматическими клетками животных, кроме человека, после иммунизации их плазмой человека . Кроме того, эти антитела против человека будут также связываться с антителами человека, которые могут фиксироваться на антигенах на поверхности эритроцитов (эритроцитов). В соответствующих условиях пробирки это может привести к агглютинации эритроцитов и позволяет визуализировать образующиеся скопления эритроцитов. Если наблюдается комкование, тест Кумбса положительный; в противном случае тест Кумбса отрицательный.

Общие клинические применения теста Кумбса включают подготовку крови для переливания в кроссе-согласовании , атипичный антитела в плазме крови из беременных женщин в рамках дородовой помощи , и обнаружение антител для диагностики иммунных опосредованного гемолитических анемий .

Тесты Кумбса выполняются с использованием эритроцитов или сыворотки (прямой или косвенной, соответственно) из образцов цельной венозной крови, взятых у пациентов путем венепункции . Венозная кровь отправляется в лабораторию (или банк крови), где обученный научно-технический персонал проводит тесты Кумбса. Клиническое значение результата оценивает врач , запросивший тест Кумбса, возможно, с помощью лабораторного гематолога .

Прямой тест Кумбса

Прямой тест Кумбса, также называемый прямым тестом на антиглобулин (DAT), используется для определения того , связаны ли антитела или факторы системы комплемента с поверхностными антигенами эритроцитов . DAT в настоящее время не требуется для тестирования перед переливанием крови, но может быть включен некоторыми лабораториями. Перед переливанием пациенты часто проходят непрямой тест Кумбса.

Использует

Алгоритм постановки основных диагнозов при положительном ДАТ.

Прямой тест Кумбса используется в клинической практике при подозрении на иммуноопосредованную гемолитическую анемию (опосредованное антителами разрушение эритроцитов). Положительный тест Кумбса указывает на то, что иммунный механизм атакует эритроциты пациента . Этот механизм может быть аутоиммунным , аллоиммунным или иммуноопосредованным механизмом, индуцированным лекарствами.

Примеры аллоиммунного гемолиза

Примеры аутоиммунного гемолиза / иммуно-гемолитического гемолиза

Иммуноопосредованный гемолиз, вызванный лекарствами

  • Метилдопа (IgG-опосредованная гиперчувствительность II типа)
  • Пенициллин (высокая доза)
  • Хинидин (IgM-опосредованная активация классического пути комплемента и комплекса мембранной атаки, MAC)

(Устройство памяти для запоминания, что DAT проверяет эритроциты и используется для проверки младенцев на гемолитическую болезнь новорожденных : R h D isease ; R = RBCs, D = DAT.)

Лаборатория

Эритроциты пациента промывают (удаляя собственную сыворотку пациента ), а затем центрифугируют с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса). Если иммуноглобулин или факторы комплемента были зафиксированы на поверхности эритроцитов in vitro , античеловеческий глобулин будет агглютинировать эритроциты, и прямой тест Кумбса будет положительным. (Визуальное представление положительного прямого теста Кумбса показано в верхней половине схемы).

Косвенный тест Кумбса

Непрямой тест Кумбса, также называемый непрямым тестом на антиглобулин (IAT), используется для выявления реакций антитело-антиген in vitro . Он используется для обнаружения очень низких концентраций антител в плазме / сыворотке пациента перед переливанием крови. В дородовой помощи IAT используется для скрининга беременных женщин на антитела, которые могут вызвать гемолитическую болезнь новорожденных . IAT также можно использовать для тестирования совместимости , идентификации антител, фенотипирования эритроцитов и исследований титрования.

Использует

Подготовка к переливанию крови

Непрямой тест Кумбса используется для скрининга антител при подготовке крови к переливанию крови . Кровь донора и реципиента должна быть совместима с ABO и Rh D. Донорская кровь для переливания также проверяется на инфекции в отдельных процессах.

  • Скрининг антител

Образец крови реципиента и образец крови каждой единицы донорской крови проверяются на антитела с помощью непрямого теста Кумбса. Каждый образец инкубируется с широким спектром эритроцитов, которые вместе демонстрируют полный спектр поверхностных антигенов (т. Е. Группы крови ).

  • Перекрестное соответствие

Непрямой тест Кумбса используется для тестирования образца сыворотки реципиента на наличие антител против образца эритроцитов донора крови . Иногда это называют перекрестным сопоставлением крови.

Антенатальный скрининг антител

Непрямой тест Кумбса используется для выявления у беременных женщин антител IgG , которые могут проходить через плаценту в кровь плода и вызывать гемолитическую болезнь новорожденного .

Лабораторный метод

IAT - это двухэтапный тест. (Перекрестное соответствие показано визуально в нижней половине схемы в качестве примера непрямого теста Кумбса).

Первая ступень

Отмытые эритроциты (эритроциты) с известными антигенами, не относящиеся к пациенту, инкубируют с сывороткой пациента, содержащей неизвестное содержание антител. Если сыворотка содержит антитела к антигенам на поверхности эритроцитов, антитела будут связываться с поверхностью эритроцитов.

Вторая стадия

Эритроциты промывают три или четыре раза изотоническим физиологическим раствором, а затем инкубируют с антиглобулином человека. Если антитела связались с поверхностными антигенами эритроцитов на первом этапе, эритроциты будут агглютинировать при инкубации с глобулином против человека (также известным реагентом Кумбса) на этом этапе, и непрямой тест Кумбса будет положительным.

Титрования

Разбавив сыворотку, содержащую антитела, можно определить количество антитела в сыворотке. Это достигается путем использования удвоенных разведений сыворотки и определения максимального разведения исследуемой сыворотки, способного вызвать агглютинацию соответствующих эритроцитов.

Реагент Кумбса

Реагент Кумбса (также известный как антиглобулин Кумбса или античеловеческий глобулин ) используется как в прямом, так и в непрямом тесте Кумбса. Реагент Кумбса - античеловеческий глобулин . Его получают путем инъекции человеческого глобулина животным, которые вырабатывают поликлональные антитела, специфичные для человеческих иммуноглобулинов и факторов системы комплемента человека. Можно использовать более специфические реагенты Кумбса или моноклональные антитела .

Средства улучшения

Оба IgM и IgG антитела прочно связываются с их комплементарными антигенами. Антитела IgG наиболее реактивны при 37 ° C. Антитела IgM легко обнаруживаются в физиологическом растворе при комнатной температуре, поскольку антитела IgM способны соединяться между эритроцитами из-за своего большого размера, эффективно создавая то, что рассматривается как агглютинация . Антитела IgG меньше по размеру и требуют помощи для достаточно хорошего мостика, чтобы образовалась зрительная реакция агглютинации . Реагенты, используемые для усиления обнаружения IgG, называются потенциаторами. У эритроцитов есть чистый отрицательный заряд, называемый дзета-потенциалом, который заставляет их естественным образом отталкиваться друг от друга. Потенциаторы снижают дзета-потенциал мембран эритроцитов. Общие потенциаторы включают раствор с низкой ионной силой (LISS), альбумин , полиэтиленгликоль (PEG) и протеолитические ферменты .

История

Тест Кумбса был впервые описан в 1945 году кембриджскими иммунологами Робином Кумбсом (в честь которого он назван), Артуром Мурантом и Робом Рэйсом . Исторически это делалось в пробирках . Сегодня это обычно делается с использованием микрочипов и гелевых технологий.

Популярная культура

В книге Артура Хейли 1959 года «Последний диагноз» жена сотрудника больницы беременна; у нее отрицательный резус-фактор, а у него положительный резус-фактор. Он упоминает об этом и рекомендует провести непрямой тест Кумбса новому помощнику патологоанатома, который предполагает, что это очевидно, и даже подписывает форму заявки, чтобы заказать сыворотку Кумбса. Из-за чрезмерной скупости главного патологоанатома он отвергает решение другого врача заказать сыворотку Кумбса и отказывается проводить непрямой тест Кумбса, вместо этого решая, что одних тестов на белок и физиологический раствор достаточно. Это решение приводит к трагическим последствиям. Эту историю рассказывает экранизация романа «Молодые врачи» 1961 года, но со счастливым концом.

использованная литература

внешние ссылки