Гемоцитометр - Hemocytometer

Гемоцитометр . Два полуотражающих прямоугольника - это счетные камеры.
Загрузка камеры
Сетка гемоцитометра (см. Таблицу)

Гемоцитометр (или гемоцитометр) является счетно-камера устройство первоначально разработан и обычно используется для клеток подсчета крови .

Гемоцитометр был изобретен Луи-Шарлем Малассезом и состоит из толстого предметного стекла микроскопа с прямоугольным углублением, которое создает камеру точного объема. На этой камере выгравирована сетка перпендикулярных линий, нанесенная лазером . Устройство тщательно продумано так, чтобы была известна площадь, ограниченная линиями, и глубина камеры. Таким образом, наблюдая за определенной областью сетки, можно подсчитать количество ячеек или частиц в определенном объеме жидкости и, таким образом, вычислить концентрацию ячеек в жидкости в целом. Хорошо используемый тип гемоцитометра - это счетная камера Нойбауэра .

Для других целей используются другие типы гемоцитометров с другими линейками. Постановления Фукса-Розенталя, обычно используемые для подсчета спинномозговой жидкости, постановления Говарда Молда, используемые для плесени на пищевых продуктах и ​​упаковках пищевых продуктов, постановления Макмастера на слайде для яиц, используемые для подсчета микробных яиц в фекалиях, постановление камеры Наготта для подсчета низких уровней лейкоцитов в белом компоненты тромбоцитов с пониженным содержанием клеток, Palmer Nanoplankton управляет для подсчета меньших планктонов. Счетчик Петрова-Хауссера, использующий улучшенные линейки Нойбауэра, используется для подсчета бактерий и сперматозоидов и предлагается с камерой различной глубины. Клетка Седжвика-Рафтера, управляющая гемоцитометром, в первую очередь предназначена для использования в микроскопии питьевой воды.

Принципы

Область сетки улучшенного гемоцитометра с линейкой Нейбауэра состоит из девяти квадратов 1 x 1 мм (1 мм 2 ). Они подразделяются на три направления; 0,25 x 0,25 мм (0,0625 мм 2 ), 0,25 x 0,20 мм (0,05 мм 2 ) и 0,20 x 0,20 мм (0,04 мм 2 ). Центральный квадрат далее подразделяется на квадраты 0,05 x 0,05 мм (0,0025 мм 2 ). Поднятые края гемоцитометра удерживают покровное стекло на 0,1 мм от размеченной сетки, придавая каждому квадрату определенный объем (см. Рисунок справа).

Габаритные размеры Площадь Объем на глубине 0,1 мм
1 х 1 мм 1 мм 2 100 нл
0,25 x 0,25 мм 0,0625 мм 2 6,25 нЛ
0,25 x 0,20 мм 0,05 мм 2 5 нЛ
0,20 x 0,20 мм 0,04 мм 2 4 нЛ
0,05 x 0,05 мм 0,0025 мм 2 0,25 нл

использование

Чтобы использовать гемоцитометр, сначала убедитесь, что специальное покровное стекло, снабженное счетной камерой, правильно расположено на поверхности счетной камеры. Когда две стеклянные поверхности находятся в надлежащем контакте , можно наблюдать кольца Ньютона . Если это так, суспензию клеток наносят на край покровного стекла, чтобы засосать в пустоту за счет капиллярного действия, которое полностью заполняет камеру образцом. Количество клеток в камере можно определить прямым подсчетом с использованием микроскопа , а визуально различимые клетки можно подсчитать по-разному. Количество клеток в камере используется для расчета концентрации или плотности клеток в смеси, из которой взят образец. Это количество клеток в камере, деленное на объем камеры, который известен с самого начала, с учетом любых разбавлений и быстрых способов подсчета:

где объем разбавленной пробы (после разбавления), деленный на объем исходной смеси в пробе (до разбавления), является коэффициентом разбавления . Например, если объем исходной смеси составлял 20 мкл, и она была разбавлена ​​один раз (путем добавления 20 мкл разбавителя), то второй член в скобках равен 40 мкл / 20 мкл. Объем подсчитываемых квадратов соответствует тому, который указан в таблице вверху, в зависимости от размера (см. Рисунок справа). Подсчитанное количество ячеек - это сумма всех ячеек, подсчитанных по квадратам в одной камере. Пропорция подсчитываемых ячеек применяется, если подсчитываются не все внутренние квадраты в пределах установленного квадрата (т. Е. Если подсчитываются только 4 из 20 в угловом квадрате, тогда этот член будет равен 0,2).

Идентифицируются части гемоцитометра (если смотреть сбоку).

В большинстве случаев используются только четыре больших угловых квадрата. Ячейки, которые находятся на верхней и левой линиях или касаются их, подсчитываются, но те, которые находятся на правой или нижней линиях или касаются их, игнорируются.

Требования

Пустая сетка гемоцитометра при увеличении в 100 раз.

Исходную суспензию необходимо тщательно перемешать перед взятием пробы. Это гарантирует, что образец является репрезентативным, а не просто артефактом конкретной области исходной смеси, из которой он был взят.

Следует использовать соответствующее разбавление смеси с учетом количества подсчитываемых клеток. Если образец недостаточно разбавлен, клетки будут переполнены, и их будет трудно подсчитать. Если он слишком разбавлен, размера пробы будет недостаточно, чтобы сделать строгие выводы о концентрации в исходной смеси.

Результаты можно сравнить, выполнив повторный тест на второй камере. Если они отличаются более чем в 2 раза на ошибку подсчета (квадратный корень из подсчета), метод отбора пробы может быть ненадежным (например, исходная смесь не была тщательно перемешана).

Счетная камера должна заполняться капиллярно после того, как крышка камеры (специальное покровное стекло с сертифицированной толщиной и плоскостностью) была установлена ​​на место. Это позволяет избежать риска осаждения / прилипания клеток к стеклу или испарения некоторого объема до того, как покровное стекло будет помещено сверху, что приведет к завышению концентрации клеток. Седиментация представляет собой меньшую проблему с бактериями, но испарение, которое более распространено в лабораториях с кондиционированным воздухом с низкой влажностью, все же должно быть сведено к минимуму.

Приложения

  • Анализ крови : для пациентов с аномальными клетками крови, когда автоматические счетчики не работают.
  • Количество сперматозоидов
  • Культура клеток: при пересеве или регистрации роста клеток с течением времени.
  • Пивоварение : для приготовления дрожжей.
  • Подсчет клеток фитопланктона
  • Обработка клеток для последующего анализа: точное количество клеток необходимо во многих тестах ( ПЦР , проточная цитометрия ), в то время как для некоторых других требуется высокая жизнеспособность клеток.
  • Измерение размера клетки: на микрофотографии реальный размер клетки может быть выведен путем масштабирования его до ширины квадрата гемоцитометра, которая известна.

использованная литература

внешние ссылки