Фетальная бычья сыворотка - Fetal bovine serum

Фетальная бычья сыворотка ( FBS ) поступает из крови, взятой из бычьего плода через закрытую систему сбора на бойне . Фетальной бычьей сыворотки является наиболее широко используемой сыворотки добавки для ин витро культуры клеток в эукариотических клетках . Это связано с тем, что он имеет очень низкий уровень антител и содержит больше факторов роста , что обеспечивает универсальность во многих различных приложениях для культивирования клеток.

Шаровые белки , бычий сывороточный альбумин (БС), является одним из основных компонентов сыворотки плода коровы. Богатое разнообразие белков в эмбриональной бычьей сыворотке поддерживает культивируемые клетки в среде, в которой они могут выживать, расти и делиться.

FBS не является полностью определенным компонентом среды и, как таковой, может варьироваться по составу между партиями. В результате бессывороточные среды с определенным химическим составом (CDM) были разработаны как предмет надлежащей лабораторной практики . Однако эффективность бессывороточных сред ограничена; многим клеточным линиям для роста по-прежнему требуется сыворотка, и многие составы бессывороточных сред предназначены для узко определенных типов клеток. Поэтому фетальная сыворотка до сих пор широко используется в культуре клеток.

Производство

Фетальная бычья сыворотка является побочным продуктом молочной промышленности. Фетальная бычья сыворотка, как и подавляющее большинство животных сывороток, используемых в культуре клеток, производится из крови, собранной на коммерческих бойнях молочного скота, который также поставляет мясо, предназначенное для потребления человеком.

Первым этапом производственного процесса фетальной бычьей сыворотки является забор крови из бычьего плода после извлечения плода из забитой коровы. Кровь собирается в стерильных условиях в стерильный контейнер или пакет для крови и затем свертывается. Обычный метод сбора - это пункция сердца, при которой игла вводится в сердце. Это сводит к минимуму «опасность заражения сыворотки микроорганизмами от самого плода и окружающей среды». Затем его центрифугируют для удаления фибринового сгустка, а оставшиеся клетки крови образуют прозрачную сыворотку желтого (соломенного) цвета. Сыворотка замораживается перед дальнейшей обработкой, которая необходима для того, чтобы сделать ее пригодной для культивирования клеток.

Второй этап обработки включает фильтрацию, как правило, с использованием цепочки фильтрации, при этом конечная фильтрация представляет собой тройные стерильные мембранные фильтры 0,1 микрометра. При обработке надежным коммерческим поставщиком сыворотки стерилизованная фетальная бычья сыворотка подвергается строгому контролю качества и поставляется с подробным Сертификатом анализа. В сертификате приводятся полные результаты испытаний и информация о происхождении сыворотки. Сертификаты анализа различаются у разных коммерческих поставщиков, но каждый обычно включает в себя следующие детали: заявление о фильтрации, страну происхождения, тестирование показателей роста клеток, тестирование на микробную стерильность, скрининг на микоплазму и вирусы, эндотоксин , гемоглобин , IgG и анализы общего белка.

Этика

В отношении процесса сбора крови были подняты этические вопросы из-за потенциальных страданий, причиненных плоду. Хотя аноксия или активный убой могут использоваться для того, чтобы вызвать потерю сознания или смерть до сбора сыворотки, воздействие кислорода на живых еще нерожденных телят может привести к тому, что они будут осведомлены перед смертью, что приведет к активным дебатам об этике сбора сыворотки.

Использование сыворотки

Фетальная бычья сыворотка коммерчески доступна от многих производителей, и поскольку клетки, выращенные in vitro, очень чувствительны, клиенты обычно тестируют определенные партии, чтобы проверить их пригодность для своего конкретного типа клеток. При переходе от партии к партии обычно клетки адаптируют к новой партии материала, например, смешивая 50% старой сыворотки с 50% новой сыворотки и позволяя клеткам адаптироваться к новому материалу.

Сыворотка хранится в замороженном виде, чтобы сохранить стабильность таких компонентов, как факторы роста. При оттаивании сыворотки может наблюдаться выпадение осадка. Это нормальное явление, которое никоим образом не влияет на качество сыворотки. Осадок может быть удален путем переноса сыворотки в стерильные пробирки и центрифугирования в течение 5 минут при 400 × g .

Чтобы ограничить количество осадков, рекомендуется разморозить сыворотку в холодильнике при 2-8 atC. При этом сыворотку следует регулярно перемешивать. Следует избегать повторных циклов замораживания / оттаивания, и перед замораживанием рекомендуется распределить сыворотку по одноразовым аликвотам.

Технические неисправности

FBS содержит сложный набор белковых компонентов, которые необходимы многим клеткам для роста, поэтому он успешно используется в культуре клеток. К сожалению, большое количество неопределенных белков может привести к нежелательной стимуляции клеток. Вот почему «сывороточное голодание» обычно используется в экспериментах, где необходимо измерить незначительные изменения в экспрессии цитокинов. Здесь FBS можно использовать для поддержания клеток, но перед экспериментом сыворотка удаляется после пассажа клеток для нормализации экспрессии цитокинов. Другой возможный подход - использовать FBS, очищенный от угля, который, по-видимому, не так стимулирует клетки в культуре, но в то же время поддерживает рост слоев здоровых клеток.

История источников

Сыворотка, производимая для использования в биотехнологической промышленности и исследовательских секторах, строго регулируется. Сбор и перемещение всех продуктов животного происхождения во всем мире строго контролируется. Ветеринарный контроль продуктов животного происхождения в значительной степени соответствует правилам, установленным ЕС (DG SANCO) и США (USDA). Текущее регулирование, регулирующее импорт побочных продуктов животного происхождения в ЕС, регулируется Регламентом (ЕС) 1069/2009 и нормативным документом (ЕС) 142/2011.

FBS - это продукт, собираемый по всему миру, причем основные коллекции сосредоточены в Соединенных Штатах, Австралии, Новой Зеландии, Канаде, Центральной Америке, Южной Америке и Европе.

Глобальные продажи

Продажи FBS в 2008 году оценивались в 700 000 литров во всем мире.

Коллекционеры, производители и конечные пользователи FBS во всем мире являются членами ISIA, Международной ассоциации производителей сыворотки. Компании-члены перечислены на веб-сайте ISIA. Полная контактная информация доступна через этот портал, и ISIA может ответить на любые вопросы, касающиеся сбора и использования этого важного ресурса.

Международная ассоциация производителей сыворотки была создана в июне 2006 года для саморегулирования ранее нестандартизированной отрасли. Заявление о миссии ISIA гласит: «ISIA устанавливает, продвигает и обеспечивает соблюдение бескомпромиссных стандартов качества и этики в деловой практике мировой индустрии поставок сывороток животных и продуктов животного происхождения. Наше основное внимание будет уделяться безопасности и безопасному использованию сыворотки и продуктов животного происхождения за счет надлежащего отслеживания происхождения, достоверности маркировки и соответствующей стандартизации и надзора ».

Смотрите также

Рекомендации

Внешние ссылки