Анализ жизнеспособности - Viability assay
Анализ жизнеспособности - это анализ , созданный для определения способности органов , клеток или тканей поддерживать или восстанавливать состояние выживания. Жизнеспособность можно отличить от состояний жизни и смерти по принципу «все или ничего» с помощью количественного показателя, который колеблется между целыми числами от 0 до 1 или, если его легче понять, с диапазоном от 0% до 100%. Жизнеспособность можно наблюдать по физическим свойствам клеток, тканей и органов. Некоторые из них включают механическую активность, подвижность, например, со сперматозоидами и гранулоцитами , сокращение мышечной ткани или клеток, митотическую активность клеточных функций и многое другое. Анализы жизнеспособности обеспечивают более точную основу для измерения уровня жизнеспособности организма.
Анализы жизнеспособности могут привести к большему количеству результатов, чем разница между живым и неживым. Эти методы могут использоваться для оценки успешности методов культивирования клеток, методов криоконсервации , токсичности веществ или эффективности веществ в смягчении воздействия токсичных веществ.
Общие методы
Хотя простые визуальные методы наблюдения за жизнеспособностью могут быть полезны, может быть трудно полностью измерить жизнеспособность организма / части организма, просто используя наблюдение физических свойств. Однако существует множество общих протоколов, используемых для дальнейшего наблюдения за жизнеспособностью с помощью анализов.
- Восстановление тетразолия. Один из полезных способов определения и измерения жизнеспособности - выполнение анализа восстановления тетразолия. Тетразолиевый аспект этого анализа, в котором используются как положительные, так и отрицательные заряды в своей формуле, способствует различению жизнеспособности клеток в образце.
- Восстановление резазурина: анализы восстановления резазурина работают очень близко к анализу тетразолия, за исключением того, что они используют силу окислительно-восстановительного потенциала, чтобы подпитывать их способность представлять жизнеспособность клеток.
- Маркер жизнеспособности протеазы: можно посмотреть на функцию протеазы в образцах, если они хотят воздействовать на жизнеспособность клеток; Эта практика в исследованиях известна как «Концепция анализа маркеров жизнеспособности протеаз». Действия протеазы прекращаются, когда клетка умирает, поэтому при использовании этого метода проводится четкая линия в определении жизнеспособности клетки.
- АТФ: АТФ - это обычная энергетическая молекула, о которой многие исследователи обладают обширными знаниями, что позволяет перенести их на понимание анализов жизнеспособности. Концепция анализа АТФ - это хорошо известный метод определения жизнеспособности клеток с использованием оценки АТФ и метода, известного как «люцифераза светлячков».
- Соотношение натрия и калия: Другой вид анализа заключается в изучении соотношения калия и натрия в клетках, которое служит показателем жизнеспособности. Если в клетках отсутствует высокий уровень внутриклеточного калия и низкий уровень внутриклеточного натрия, то (1) клеточная мембрана может быть повреждена и / или (2) натрий-калиевый насос может работать неправильно.
- Цитолиз или утечка через мембрану: в эту категорию входит анализ лактатдегидрогеназы . Анализы, подобные этим, содержат стабильный фермент, общий для всех клеток, который можно легко обнаружить, когда клеточные мембраны перестают быть неповрежденными. Примеры этого типа анализа включают в себя пропидии йодид , трипановый синим , и 7-Aminoactinomycin D .
- Митохондриальная активность или каспазы: ресазурина и Формазаны ( МТТЫ / ХТТ) может анализ на различных этапах апоптоза процессе , что смерть предвещает клетки.
- Функциональные: анализы функции клеток будут очень специфичными для исследуемых типов клеток. Например, подвижность - это широко используемый анализ функции сперматозоидов. Выживаемость гамет обычно можно использовать для определения фертильности . Эритроциты исследовали на деформируемость , осмотическую хрупкость , гемолиз , уровень АТФ и содержание гемоглобина . Для трансплантируемых целых органов окончательный анализ - это способность поддерживать жизнь после трансплантации, анализ, который не помогает предотвратить трансплантацию нефункциональных органов.
- Геномная и протеомная: клетки могут быть проанализированы на активацию путей стресса с использованием микрочипов ДНК и протеиновых чипов.
- Проточная цитометрия: автоматизация позволяет анализировать тысячи клеток в секунду.
Как и во многих других анализах жизнеспособности, количественные измерения физиологической функции не показывают, возможно ли восстановление и восстановление повреждений. Анализ способности клеточной линии прилипать и делиться может быть более показателем зарождающегося повреждения, чем целостность мембраны.
Лягушонок и головастик
«Лягушачий» - это тип метода анализа жизнеспособности, который использует чашку с агаром для окружающей среды и состоит из посева серийных разведений путем прикрепления их булавками после того, как они были разбавлены в жидкости. Некоторые из его ограничений включают то, что он не учитывает общую жизнеспособность и не особенно чувствителен к тестам на низкую жизнеспособность; однако он известен своим быстрым темпом. Метод «тадполинг», применяемый после развития «лягушки», аналогичен методу «лягушки», но его тестовые клетки разбавляются в жидкости, а затем сохраняются в жидкости в процессе исследования. Метод «тадполинга» можно использовать для точного измерения жизнеспособности культуры, что и отражает ее основное отличие от «лягушки».
Список методов определения жизнеспособности
- Кальцеин AM
- Клоногенный анализ
- Анализ гомодимера этидия
- Эванс синий
- Гидролиз диацетата флуоресцеина / окрашивание йодидом пропидия (окрашивание FDA / PI)
- Проточной цитометрии
- Формазаны основанные анализы ( МТТЫ / ХТТ)
- Зеленый флуоресцентный белок
- Лактатдегидрогеназа (ЛДГ)
- Метиловый фиолетовый
- Поглощение нейтрального красного ( витальное пятно )
- Йодид пропидия , окраска ДНК, которая может дифференцировать некротические , апоптотические и нормальные клетки .
- Ресазурин
- TUNEL анализ